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细胞被“黑胶虫”污染了,怎么办?

2021.03.22

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正在培养的细胞状态突然恶化,在显微镜下观察时感觉有黑点状的不明物体在游动。说是真菌污染也没看见悬浮物,如果是细菌污染也没感觉培养基pH变化速度加快,难道是支原体?­­但是支原体怎么可能在低倍数的显微镜下看得这么清楚?


科研学术圈一直流传着这样一种生物——它,可以污染细胞,并且污染后短期内不会影响贴壁生长的细胞贴壁;同时污染后的培养基也不会像细菌、真菌污染之后的培养基迅速变黄浑浊,且有菌丝团漂浮在上清中。但是,没有人能确切地说出它到底是原虫还是其他病原微生物,也没有一个标准的图像记录,不管是相机实拍还是扫描电镜,甚至都没人能确定到底是“黑焦虫”还是“黑胶虫

 

有研究人员通过检测,发现实验室的黑胶虫为变形杆菌a-2亚群,其存在于胎牛血清中。但后又有研究表明黑胶虫并非生物,而是一种碳酸钙纳米颗粒或硅复合物,称其为硅小体,来源于培养基对玻璃细胞培养器皿的侵蚀。在黑胶虫血清的说法流行后,也有研究者表明自己实验室相似的情况出现原因是由于细菌污染,并从被黑胶虫污染的细胞培养基中分离到了一株短波单胞菌属的新菌株[1]。实际上,并不是所有的细菌污染马上就会导致细胞立即死亡,也不是所有的污染会让培养基变黄且浑浊,相反有时细菌污染会让培养基变得更红(细菌分解蛋白质产胺会导致pH值上升因此变红)。

 

很多人猜测,所谓的黑胶虫可能只是凋亡小体或细胞碎片,因为细胞状态好的时候就看不到了,而当颗粒物直径足够小,在液体中做不规则的布朗运动也很正常。尽管到目前,关于黑胶虫究竟是什么仍无定论,但我们应尽量避免黑胶虫污染。        关于血清里面有“黑胶虫”的说法仍屡见不鲜,那到底如何做才能真正安心呢?或许只有真正原装进口的特级胎牛血清才能真正彻底让“黑胶虫血清论”彻底消失。

 

那我们遇到“黑胶虫”污染时应该怎么呢?首先,换好一点的值得信赖的胎牛血清,血源和制备工艺很重要。同时,停止热灭活处理血清,目前大部分高品质的血清都不需要热灭活操作,甚至通常因为较高温度处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。同时热灭活过的血清,蛋白等沉淀物的形成显著增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染。所以在不是做免疫学研究或昆虫细胞培养等特殊场景时,血清尽量不经热灭活。

 

虽说是“黑胶虫”,但是其实有很大可能性是被其他微生物污染,所以正常情况下如果对细胞状态影响很大应该直接丢弃,若细胞非常珍贵,可以用伯氨奎、磺胺、四环素、贝尼尔,庆大霉素进行洗涤。尽早更换品质好的的一次性细胞培养耗材以及相关培养试剂。

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参考文献:

[1]周怡婷,高增鸿,杨嘉文,汪瑾,郭雅彬,马广伟.细胞培养中“黑胶虫”污染的检测及防治[J].生物化学与生物物理进展,2020,47(01):61-70.


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